Colorimeter
Met
een colorimeter meet je de hoeveelheid licht die
door een gekleurde oplossing wordt
geabsorbeerd.De hoeveelheid licht die door een
oplossing wordt geabsorbeerd of doorgelaten is
een maat voor de concentratie van die
oplossing.
Hierboven
staat als voorbeeld een door jodium blauw
gekleurde zetmeeloplossing.
Als daar geel licht doorheen gaat, wordt bijna
alles geabsorbeerd en de lichtmeter meet bijna
geen doorgelaten licht.
Nadat
de zetmeeloplossing afgebroken is en de
vloeistof in de cuvet helder is geworden, wordt
het meeste licht doorgelaten en meet de
lichtmeter veel licht.
- Gebruik
alleen zeer schone cuvettes of reageerbuizen
!!
- Laat
de meter altijd ongeveer 10 minuten
opwarmen.
- Gebruik
altijd een kleurfilter met de
tegenovergestelde kleur van de oplossing.
Dus een geelfilter voor een blauwe oplossing
en een roodfilter voor een groene
oplossing.
Gebruik
voor het meten van een troebele oplossing
(bijvoorbeeld bij de eiwitafbraak door
pepsine) een roodfilter.
Op de meter zit meestal een knop waarmee de
gevoeligheid kan worden ingesteld en een knop
waarmee met de "blanco" de meter op de
maximale uitslag kan worden ingesteld.
Sommige meters hebben 2 schaalverdelingen op
de meter namelijk een schaalverdeling die de
hoeveelheid doorgelaten licht weergeeft in %,
de transmissie en een logaritmische
schaalverdeling die de zogenaamde extinctie
weergeeft.
J0
= de intensiteit van de bundel die door de
blanco gaat
J1
= de intensiteit van de bundel die door de
oplossing wordt doorgelaten.
Transmissie = (J1 :
J0)
Absorptie = (J0 -
J1):J0
Extinctie
=10log (J0 :
J1)
De
extinctie is rechtevenredig met de
concentratie!!!
- Maak
een blanco-oplossing. De blanco is
bijvoorbeeld een cuvet met water.
Als je enzymproeven meet bijvoorbeeld de
afbraak van zetmeel door amylase of de
afbraak van eiwit door pepsine, dan is de
blanco een buisje met de eindtoestand, als
alle stof verteerd is en de oplossing helder
geworden is.
- Plaats
de blanco in de meter en zet de meter op
maximale transmissie (100% = 1).
- Als
je een onbekende concentratie moet meten moet
je eerst een ijklijn maken.
Maken van een ijklijn
- Maak
een reeks van verschillende
concentraties.
Bijvoorbeeld zetmeel 1%, 0.1%, 0.01%,
0.001%.
- Voeg
aan alle buisjes evenveel jodiumoplossing toe
om de oplossingen blauw te kleuren.
- Meet
of bereken van alle oplossingen de
extinctie.
-
Als
je de concentraties op de X-as zet en de
extincties op de Y-as, dan krijg je een rechte
lijn. Met behulp van deze grafiek kan je
onbekende concentraties bepalen via de
absorpties.
|
